如何选择酶抑制剂，我们来帮你解答

当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就会被释放出来或被激活，使电泳结果复杂化，影响最终结果分析。为了避免这些情况的出现，建议在样品制备时尽可能在低温下进行。此外，许多蛋白酶在 PH9 以上就失活了，因此 Tris 碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用Roche蛋白酶抑制剂。对于我们想要研究的蛋白来说，选择性和有效的抑制这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。因此通常建议复合使用蛋白酶抑制剂，如广谱蛋白酶抑制剂「鸡尾酒」，见下表（来 自《蛋白质电泳实验技术》）。

 

蛋白酶抑制剂	有效抑制的酶
PMSF ( Pheylmethylsulfonyl fluoride )是很常见的抑制剂，使用浓度为 1mmol/L	不可逆抑制丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。
AEBSF 丝氨酸抑制剂，使用浓度为 4mmol/L	AEBSF 的抑制活性与 PMSF 相近，但它更易溶于水而且毒性低
EDTA，EGTA，使用浓度为 1mmol/L	通过鳌合蛋白酶维持活性所必需的金属离子来抑制金属蛋白酶。
多肽蛋白酶抑制剂，使用浓度为 2-20ug/ml	亮肽素（Leupeptin）能抑制多种丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶；抑肽素（pepstatin）抑制天冬氨酸蛋白酶；抑肽酶（aprotinin）能抑制许多丝氨酸蛋白酶；苯丁抑制剂（bestatin）能抑制氨基酸多肽酶
TLCk，TPCK，使用浓度为 0.1-0.5mmol/L	不可逆的抑制丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶
苄脒（Benzamidine）使用浓度为 1-3mmol/L	抑制丝氨酸蛋白酶

 
蛋白酶抑制剂分为含有 EDTA 或不含两大类，后者用于金属螯合亲和层析。除了提供方便的片剂形式，铝箔包装进一步提高了研究者操作的方便性。

优势：

• 完整保护作用蛋白不被降解；
• 水溶性片剂，无需繁琐的称量，混合及 DMSO 溶解，使用方便；
• 同时持续抑制来自动植物，酵母，细菌和真菌等中的丝氨酸蛋白酶，半胱氨酸蛋白酶等多种蛋白酶

   

 

 

 

PhosSTOP 也以铝箔片剂形式提供，提高了研究者操作的方便性。工作液可以存放于 2～8 °C 一个月，或 -15～-25°C 下 6 个月以上。为了保证蛋白的完整性，应该在抽提步骤中同时使用 cOmplete 蛋白酶抑制剂混合物。

优势：

• 高效保护蛋白免受磷酸酶攻击；
• 灵活使用，可与蛋白酶抑制剂同时使用，实现磷酸酶和蛋白酶的全面抑制作用；
• 同时抑制包括酸性和碱性磷酸酶，及丝氨酸/苏氨酸/络氨酸蛋白磷酸酶等多种磷酸酶。这种抑制剂药片可用于缓冲福尔马林（福尔马林固定术）。有以下多个货号可供选择