培养基如何消除组织培养的污染？

培养基一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，如何消除组织培养的污染？可以参考下表所列的条件：
如何消除组织培养的污染？

  当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。

  高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

 ① 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。

 ② 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。

  ③ 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。

  ④ 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。

  ⑤ 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

  ⑥ 重复步骤4。

  ⑦ 在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。

培养基操作建议：
    1、商品化的应根据使用说明书上的要求进行储存。标签上应标有批号，生产日期、有效期及有关特性。所采用的保藏和运输条件应使限度失去水分并提供机械保护。
    2、配制好之后应保存在2～25℃避光的环境。若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般在一年内使用，琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。若要长期保存，琼脂平板应密闭包装或置于密闭容器中以防止水分流失。
    3、保存于密闭容器中，可防止水分流失以延长保存时间。
    4、灭菌后应立即取出，不得储藏在高压菌器中，避免影响质量。制备好之后应保存在2～25℃、避光的环境。
    5、固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次，融化后应放在45～50℃的水浴中，不得超过8小时。