DIG标记的优势和应用

DIG标记技术源于一种从洋地黄类植物（毛地黄和毛花毛地黄）中提取的类固醇物质—Digoxidenin（DIG）。由于洋地黄植物的花和叶片是自然界Digoxidenin的唯一来源，因此抗DIG的抗体不会与其他的生物物质结合，从而可以满足特异性标记的需要。这一点，正是DIG胜于生物素的（Biotin）的地方—同样是小分子标记物，生物素广泛存在于各种组织中，对于灵敏度很高的标记检测实验来说，样品自身含有的内源生物素，就会对结果产生干扰。DIG就能够很好地避免这个问题。
 

1. DIG技术特点
   1. 可用于标记核苷酸或蛋白质
   2. 检测方法：显色法、荧光或化学发光法
   3. 安全环保，不接触放射性物质，不会对环境造成污染
   4. 曝光时间短，结果显示时间以分钟计算，无需几小时甚至几天的自显影过程
   5. DIG标记的探针至少可贮存一年以上，可一次大量制备
   6. 可轻松进行探针剥离和重探

 
2.  应用领域
DIG系统能够安全高效地标记DNA、RNA或是寡聚核苷酸探针，这些探针可以广泛应用在：

1. Southern blot,Northern blot,dot blot
2. 菌斑杂交
3. Microarray
4. ELISA
5. 原位杂交

 
3.  技术细节
DIG 通过一个含有11个碳原子的空间臂与尿嘧啶核苷酸上的C5位置相连，一定浓度的DIG标记的核苷酸可以通过DNA polymerase(如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase (如SP6, T3或T7 RNA Polymerase)或是末端转移酶（Terminal Transferase）的作用掺入到核苷酸探针中；也可通过随即引物标记（random primed labeling）, 缺口平移（nick translation），PCR，3’端标记/加尾或是体外转录制备带有DIG标记的探针。当然也可以通过化学合成的方法进行核苷酸的标记。