罗氏FuGENE 6 FuGENE® HD转染试剂

罗氏FuGENE 6 FuGENE® HD转染试剂

一、独一无二的非脂质体型FuGENE 6 

    在转染方面，Roche的王牌产品FuGENE 6同样享有极佳的声誉。这个早在上世纪90年代中期由宝灵曼研发的王牌产品历时多年，依然是当今转染领域最好用的产品之一。在2004年度产品评选活动中 FuGENE 6当选2004年度最值得信赖试剂产品，一位投票人在推荐理由中这样写到：“从未令我失望过。”确实，我自己以前也曾经试过在同样条件下用 Clonfectin、Lipofectamine等几个转染试剂同时转染实验室里3种不同的细胞株，暂且不说实验的复杂程度和转染效率高低——单说这转 染后报告基因表达效果，镜下检查FuGENE转染的细胞的绿色荧光都是最明亮，也是最多的。对于做表达的人来说，夫复何求？当然，这并不排除有细胞株的影 响因素在内。

 特点 

 

    FuGENE 6是一种非脂质体型（non-liposomal）转染试剂，由专利配方的脂质混合体（lipids）和特定成分组成，通过加入的创新性组分，在增加核酸 稳定性的同时，提高转染试剂－DNA复合体穿越细胞膜的效率；而这一过程速度的提高，预示了将整个转染过程对正常细胞生理功能的影响减到最小。这些是阳离 子脂质转染试剂所不能达到的。转染试剂-DNA复合物可以直接加入细胞培养基中，有血清也不怕，而且转染前后都不需要更换培养基，不用去除转染试剂。 FuGENE 6的细胞毒性很小，每一批产品出厂前都要经过严格质控，其中就包括在有血清存在且无需更换培养基的情况下， COS-1细胞与FuGENE6转染液或FuGENE6-DNA复合体温育26小时,PI染色后流式细胞仪分析细胞存活率必须在95%以上!

 适用的细胞系范围 

FuGENE 6的细胞毒性很小，可转染细胞系范围非常广泛，到目前为止已经超过750多种，范围之广无人能及，其中还包括90多种原代细胞和部分不易转染的细胞株/系。

 转染核酸范围和大小 

    FuGENE 6转染试剂不单可用于常规的DNA转染，还可用于长达10kb的大片段DNA, 寡聚核苷酸及核苷酸的高效转染，操作简便，不需要特殊的优化过程，大大减少试验中的操作步骤，适用于高通量检测方面的应用。但是，FuGENE 6 确乎不建议用在RNA或者siRNA转染上，在RNAi风行的今天确实是个遗憾。要用FuGENE 6 做RNAi，你只好用siRNA表达质粒载体了。

 操作流程 

    FuGENE 6的操作也是非常简便的（6孔板操作方案）

1. 培养细胞计数铺板在含血清，但不含抗生素的正常培养基中，到转染当天50%—80%汇片。

2. FuGENE 6在室温化冻后混匀后取3－6ul，用无血清培养基稀释到100ul，混匀孵育5分钟

3. 按照转染试剂:DNA(ug)比例3:1直接加入DNA，混匀并孵育15分钟以上。（孵育较长的时间，比如30min-60min，有助于提高某些细胞株的转染效率，但不超过2小时为宜）

4. 逐滴加入培养细胞的6孔板中，培养细胞1－3天检查结果。

    由于操作步骤简便，FuGENE 6 转染方案很容易放大，也很适合进行高通量筛选。

 用量和价格 

    价格和包装大小永远是实验室关注的重要因素。其实不单这个，每次的用量和成本，也就是一个包装可用的次数也应该是我们所关注的。FuGENE 6的价格1ml298美元，大概￥3000出头，千万别以为很贵，FuGENE 6的用量很省的，同样条件用量比别家少一大半以上－－你要知道，按照6孔板转染实验来计算，每次只需要3－6ul，1ml FuGENE 6足够做300次6孔板转染！而其他有些主流品牌起码要10－24ul/次6孔板 呢！这里要特别注意，FuGENE 6产品标注的可用转染次数是以6孔板为标准的，而有些品牌是以24孔板为基础，二者没有可比性，因为6孔板每孔面积比24孔板大5倍，所以，千万别以为 1ml不如人家包装大啦，其实每次的成本是很节约的，能用的次数其实还要更多呢！在进口产品中这个价格相当实惠的！浓缩才是精华，再加上FuGENE 6的良好性能，这么多年来依然笑傲江湖，自然有它的道理。

 注意事项 

    FuGENE 6要求的转染时铺板密度在50％－80％间。由于转染试剂保存在80％乙醇中，FuGENE 6平时应该保存在-20度，在4度条件下可以只能稳定3周而不影响活性。由于有乙醇保护，反复化冻开盖不会导致氧化所以不影响活性，所以不要分装 FuGENE 6！不均匀的黏附到新的管壁上反而影响试剂稳定！另外要注意使用前必须完全化冻到室温，并且要振荡1秒以充分混匀才可以取样稀释。稀释时要特别注意将 tips插入无血清培养基中迅速吹打混匀，不要靠壁或者只在液面吹打，防止脂质成分平铺在培养基表面而影响复合物形成。千万不要先加转染试剂再加无血清培 养基稀释，切记。FuGENE 6 很怕某些塑料表面的（只有Tips和原装管子那种塑料安全），可能里面的脂质会有反应吧。

    同样的，稀释用培养基必须是无血清培养基，从而保证转染试剂-DNA复合物形成。由于转染试剂可能会将抗生素带入细胞或者增加细胞通透性而影响细胞存活 率，所以要求用不添加抗生素的培养基培养细胞，即使要用抗生素筛选，也要至少培养足够的时间让抗性基因表达后再换筛选培养基。细胞培养时血清的存在不影响 转染效果，甚至，实验表明在有血清的培养基中转染而且不更换培养基，转化效率还好一点点。

    DNA最好的低内毒素的，因为某些细胞株对内毒素敏感。最好精确定量DNA，保证转染试剂(ul)和DNA(ug)比例3：1。Carrier DNA可免则免，如果非要加不可，那就多加些转染试剂，保证3:1的总DNA量。反正FuGENE 6 毒性小，多加些也不会毒死细胞的。某些细胞株如果表达不好或者转染效率不高还可以试试同时按比例增加转染试剂和DNA的量，往往有帮助。

二、一个强过一个的D家两姐妹

    DOTAP和DOSPER可算得上是久经考验的古董级的老产品了，操作简便，“内外兼修”的DOTAP作为单价阳离子脂质体转染试剂，主要特点是转染效率 高，对细胞毒性小。DOTAP可以吸附带负电荷的DNA、 RNA、寡核苷酸、核蛋白以及其他的大分子转染到真核细胞中，对大多数细胞株的转染效率普遍要比传统的磷酸钙和DETA－葡聚糖的方法高5－100倍，而 且，DOTAP除了可以进行体外操作外，还可以进行体内操作，因此目前已经被广泛应用于在非人类的动物模型基础上的基因治疗的研究中。此外，决定选择 DOTAP的实验室人员还有一个原因，那就是DOTAP可以在混合物中有或没有血清的情况高效转染，这为一些需要血清“保护”的细胞株的转染提供了方便。

    DOTAP转染试剂固然好用，但是它的“妹妹”DOSPER转染试剂的设计更为巧妙。DOSPER试剂是经改进的多价阳离子脂质体转染试剂 （polycationic lipid）。与DOTAP 不同，DOSPER的脂肪酸连接到了丙烷骨架的1、3位，这一特殊的结构可以使得DOSPER可以在较低的浓度下发挥作用 （DOTAP所需比例为5—10ug /ug DNA，DOSPER为2—10ug/ug DNA），从而减小对细胞本身的损伤，带来更好的转染试验结果，适用于某些不易转染的细胞株。可谓一半用量，双倍效果。

三、各有专攻的X兄弟

    RNA干扰技术已经成为了研究基因功能的有力工具，任何一个RNA interference实验的成功都有赖于转染试剂的选择，没有高效的转染，siRNA就不能有效的引发相应的细胞响应，会直接影响同一siRNA的抑 制效果。为了弥补FuGENE 6 不能转染siRNA的遗憾，近期罗氏推出了X－tremeGENE siRNA Transfection Reagent，这种转染试剂专门针对siRNA的转染（包括siRNA直接疽约皊iRNA和表达质粒共同转染），比较于同类产品来说，主要优势一是有 效的基因敲除（gene knockdown）效果（见下图），其次是其兼容性，因为X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent可以用于siRNA直接转染以及siRNA和表达质粒共同转染。第三就是它可以高效转染常见的哺乳动物的细胞株及部分不易转染的细胞株，而 且对细胞的毒性和物理破损低，X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent操作简便，反应前后无需更换介质。siRNA专用的转染产品经过专门优化，应该优于多功能转染试剂，而且产品具有很高的性价比，每个反应仅 需要约0.40美金（1ml可做400次24孔板）。

        除此之外，罗氏也提供了一种X-tremeGENE siRNA Dicer Kit，进一步方便了siRNA转染，这一试剂盒模拟了细胞RNAi的途径－－利用Dicer RNase将双链RNAs加工成小的21—24bp的小分子双链RNA断片段，体外生成d-siRNA，这样就可以在短时间内准备好更有效的siRNA用 于转染。

    “术业有专攻”的X-tremeGENE Q2转染试剂则是专门针对Hela, K-562和Jurkat细胞而优化设计的，可以有效提高转染后蛋白表达，适用于在这几类细胞中大量蛋白表达研究。

Roche的FuGENE 6 转染试剂低毒高效、使用方便，应用细胞株已达500多种，可谓有口皆碑——即使近10年来Roche在试剂领域甚为低调甚少宣传，一支独秀的FuGENE 6 依然让Roche保持在转染领域数一数二的地位。经过10年的沉积，如今Roche新推出FuGENE HD转染试剂，再度将转染推向一个更高的层次——正在预备实验的你，对转染的最高期望是什么呢？

 

全世界30%的转染用户使用的FuGENE®，其优势在于：

——Off-target效应低：转染试剂将外源核酸片段导入细胞的同时，也将影响内源基因表达水平，从而对细胞的代谢和状态造成不利影响，或影响实验数据的客观性，这称为off-target效应。

FuGENE®只是LipofectAMINE 2000的16%，试验表明，转染MCF-7 cells (ATCC® HTB-22™)时，采用micro-array检查发现，使用LipofectAMINE 2000转染导致细胞内源1741个基因表达发生变化，而使用FuGENE® HD只有282个内源基因表达发生变化。[发表于Biochemica 4, 22-25 (2006)，请登www.roche-applied-science.com/publications/biochemica.htm]

——细胞毒性低：这是下游实验顺利进行的保证。

 

新推出FuGENE® HD转染试剂的优势：

继堪称转染试剂精粹的FuGENE® 6之后，罗氏推出全新的FuGENE® HD，全面提升转染实验结果，为您实验助一臂之力。

l         高效转染目前已有的转染试剂难转染的细胞株，例如：MCF-7，RAW 267.7，PC-3，Hela，MA-10，HepG2，SH-SY5Y，A7r5，STO，SCC-61，STSAR-90，SQ20B，T98G，STSAR-90，A375，A549等；

l         同时适用于昆虫细胞，多种癌症细胞株，原代细胞和干细胞转染；

l         更低的细胞毒性，有助获得更多具有活性的功能细胞，避免和减少使用其他转染试剂导致的对细胞应答和细胞基因表达的影响；

l         显著提升目的基因在常用的细胞株中的蛋白表达水平，通过调整转染试剂的用量，就可轻松优化蛋白表达；

l         更安全可靠的组份，不含任何动物来源成份，经0.1um过滤灭菌，100%血清中依然有活性；

l         稳定的试剂，室温状态下依然稳定；简便的操作步骤，快速实验方案同时适用多种细胞，满足大通量的实验操作需要。

l         应用范围更广，FuGENE HD 非脂质体配方不含动物来源成分，令实验适用范围更广，在特殊实验需要时你也不必另外购买不含动物来源成分的转染试剂，一支搞定。FuGENE HD 成分相当稳定，对付各种细胞、各种转染规模，操作步骤都一样简单固定，不用去血清或者更换培养基，省时省事。

l         性价比更高，3531元人民币/1ml（足够做300次6孔板转染），每次（相当于35mm培养皿）仅仅11元，不算折扣。脂质体2000，4千6百多才仅仅够做150次6孔板呢（每次要31元，虽然试剂体积有1.5ml）。如果想尝试一下小包装，1738/0.4ml（足够做120次6孔板转染。），价格也很相宜了。

 

实验图片：

bata-gal表达载体转染Hela细胞(A)FuGENE HD转染试剂(B)L2K转染试剂（按照说明书标准转染程序），24小时后染色显示(A)细胞保持正常形态

 

  

GFP表达载体在HEK-293 EBNA细胞表达，转染试剂用量和基因产物表达

 

  

GFP表达质粒转染RAW 264.7细胞(A)FuGENE HD转染试剂(B)L2K转染试剂（按照说明书标准转染程序），48小时后的结果，左下图为Guava PCA-96 AFP系统分析转染细胞的比率

 

 

产品信息：

 

品牌	货号	品名	规格	价格
Roche	4709691001	FuGENE HD Transfection Reagent	0.4 ml (up to 120 transfections)	2098
Roche	4709705001	FuGENE HD Transfection Reagent	1.0 ml (up to 300 transfections)	4851
Roche	4709713001	FuGENE HD Trans Rgt Mega-pack	5 x 1 ml (up to 1,500 transfections)	23486
Roche	5061369001	FuGENE HD Transfection Reagent	10 ml	46954
Roche	11814443001	FuGENE 6 Transfection Reagent	1ml（300 transfections)	3545
Roche	11988387001	FuGENE 6 Transfection Reagent	5 x 1 ml (1,500 transfections)	15935